استخراج، خالص سازی و تعیین ویژگی های بیوشیمیایی نوعی آنزیم پروتئاز از باکتری bacillus subtilis dr8806

پروتئازها یکی از مهم ترین آنزیم های صنعتی با کاربرد مستقیم در زندگی روزمره مانند پودرهای لباس شویی حاوی آنزیم، هستند. نیاز فراوان به این نوع آنزیم باعث افزایش علاقه به کشف انواع جدید آن شده است بطوریکه در این مطالعه نیز استخراج، خالص سازی و مطالعه ویژگی های بیوشیمیایی نوعی آنزیم پروتئاز از باکتری باسیلوس سوبتیلیس dr8806 انجام پذیرفته است. ابتدا شرایط تولید آنزیم بهینه سازی شد. سپس بهترین منبع نیتروژن و کربن برای رشد باکتری و تولید آنزیم انتخاب شد. بهینه ی تولید آنزیم در حضور پپتون و گلوکز بود. در ادامه با استفاده از روش کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون آنزیم خالص سازی شد. با استفاده از sds-page و زایموگرام وزن مولکولی پروتئاز خالص شده 37 کیلو دالتون برآورد شد. این آنزیم در ph بین 5 تا 10 فعال است و بهینه فعالیت و پایداری آن در 8=ph است. همچنین مطالعات اثر دما بر روی فعالیت و پایداری آنزیم خالص شده نشان داد که اگرچه دمای بهینه برای فعالیت آنزیم 45 درجه سانتیگراد است لیکن آنزیم پس از یک ساعت انکوباسیون در دمای 70 درجه سانتی گراد 70% فعالیت خود را کماکان حفظ می کند. بعلاوه فعالیت آنزیم در حضور یون های فلزی مانند ca2+، mg2+، k+ و fe2+ افزایش یافت. درحالی که یون های ba2+ و zn2+ فعالیت آنزیم را به طور کامل مهار کردند و یون های cu2+، co2+ و ni2+ فعالیت آنزیم را کاهش دادند. همچنین فنیل متیل سولفونیل فلوراید (pmsf) سبب کاهش شدید فعالیت آنزیمی شد، لذا این فرضیه مطرح شد که آنزیم خالص شده جزء دسته سرین پروتئازها است. در بررسی اثر دترجنت ها و سایر عوامل شیمیایی مشخص شد تریتون x-100 هیچ گونه اثر مشخصی بر فعالیت آنزیم ندارد و دترجنت کاتیونی ستیل تری متیل آمونیوم برماید (ctab) بیش از دترجنت آنیونی sds فعالیت آنزیم را کاهش داد. آنزیم موردمطالعه ویژگی بالایی به کازئین در مقایسه با ژلاتین، (bovine serum albumin) bsa و n-استیل l -تیروزین اتیل استر مونوهیدرات (atee) نشان می دهد. از ویژگی های منحصربه فرد آنزیم افزایش فعالیت در حضور حلال های آلی مانند (متانول تاحدوداً 260% و اتانول تا حدوداً 240% در غلظت های متفاوت) است.?